人視網膜母細胞瘤細胞（Y79）該細胞由Reid TW及其同事從病人右眼切除的腫瘤進行原代培養建立而成，此病人有很強的視網膜母細胞瘤的母系家族遺傳性。

【細胞名稱】人視網膜母細胞瘤細胞

【細胞別名】y79；人視網膜母細胞瘤細胞

【組織來源】視網膜

【細胞形態】圓形、成簇細胞樣

【生長特性】懸浮生長

【培養體系】RPMI-1640+20%FBS+1%P/S

【傳代比例】1:2-1:3，每 2-3 天換液一次

【培養條件】氣相：95%空氣+5%二氧化碳，溫度：37℃

【凍存條件】凍存液：55%基礎培養基+40%FBS+5%DMSO；存儲條件：液氮

【安全性】建議在二級生物安全臺內操作，并做好個人防護。

【用途】僅供科研使用

二、復蘇及傳代方法

1、細胞株的復蘇（凍存管）

（1）將凍存管在37℃水浴鍋中迅速全融化，并適當輕輕搖晃促融。快速、全融化可以提高細胞的復蘇效果。

（2）打開凍存管前時用75%酒精擦拭細胞凍存管外壁。

（3）將全融化的細胞直接離心，或者轉移至無菌15ml或其它合適無菌離心管中，400g離心5min，吸除上清，注意不要吸走細胞沉淀，然后用新鮮*全培養液重懸后轉移至培養器皿，混勻，置于CO2培養箱37℃培養。

（4）第二天視貼壁或生長狀態，更換培養液。

注意：如果收到的凍存管不能及時進行復蘇，還請置于-80℃或液氮中進行暫存，并盡快復蘇進行培養。

2、細胞株的復蘇（T25瓶）

（1）將收到T25瓶脫外包后用75%酒精擦拭瓶外壁。

（2）置于倒置顯微鏡下觀察細胞狀態，看是否有異常；無異常后，采用移液器移去多余的培養液，置于CO2培養箱37℃培養過夜。

（3）第二天視貼壁或生長狀態，考慮進行換液或傳代，傳代比例參考1:2~1:4。

三、注意事項

1、每支凍存管約含1×106個細胞，體積為1ml，預期存活率60-90%，建議復蘇至1個T25瓶或1個6cm培養皿中。如果復蘇后存活率較低，可以消化后轉移至3.5cm培養皿/T12.5瓶中，這樣細胞生長會更好。

2、如果本產品是常溫運輸，并且是培養瓶中充滿*全培養液的貼壁細胞，收到細胞后：

（1）及時拍照記錄有無漏液/瓶身破損現象。

（2）用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。先不要打開培養瓶蓋，將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2~4小時，以便穩定細胞狀態。

（3）仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息。

（4）靜置完成后，取出細胞培養瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態。

3、如果細胞密度超過85%請盡快進行傳代操作；如果懸浮的細胞較多，請將培養瓶置于培養箱中靜置過夜以使懸浮的細胞再次貼壁。如果收到的是常溫運輸的離心管裝的懸浮細胞，可以直接取出轉移至培養皿或培養瓶中培養。若培養液顏色正常則保留培養液繼續培養，并且在*次更換培養液時，保留一半原培養液，并加入一半新鮮培養液，這樣可以盡量避免由于培養液或血清差異導致細胞生長的不適應，確保細胞良好的生長狀態。

4、細胞培養請在生物安全柜臺中進行操作，并嚴格遵守無菌操作。

上海牧榮生物科技有限公司

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