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用于干細胞培養的耐熱 FGF2介紹

更新時間:2023-08-11      點擊次數:2067

用于干細胞(hESC 或 iPS)培養的耐熱 FGF2


干細胞培養中需要 FGF2(也稱為 FGF-basic 或 bFGF)來維持干細胞處于未分化和多能狀態。然而,FGF basic 不穩定,需要每天更換培養基并添加新的 FGF basic,這是昂貴、乏味且耗時的。為了克服這個問題,開發了 FGF basic 的熱穩定版本,以支持 2 天介質更換協議,而不是每日介質更換。為期 2 天的培養基更換方案使干細胞研究人員無需在周末返回實驗室,使其成為干細胞研究人員的理想選擇。耐熱 FGF2 經過精心設計,可增強在培養基中的穩定性,而不影響其生物學功能。


熱穩定性 FGF2 (FGFbasic-TS) 在細胞培養基中的穩定性

當在 37° 的典型干細胞培養基中培養時,培養 2 天后,相當數量 (35%) 的熱穩定 FGF2 (SPEED SKU# SDP1025) 在培養基中保持完整,而常規 FGF2 (SPEED SKU# YCP1143)第一天后就無法檢測到。結果表明,熱穩定 FGF2 的降解速度比常規 FGF 堿性慢約 3 倍。


耐熱 FGF2 對酶消化的抗性

當暴露于胰蛋白酶時,FGF2 在 4.5 小時后顯著降解,而 FGF2-TS(熱穩定)水平僅略有降低。值得注意的是,肝素可保護 FGF2 和 FGF2-TS 免受胰蛋白酶消化。與 FGF basic 相比,熱穩定 FGF basic 更能抵抗蛋白水解降解。


熱穩定性 FGF2 (FGFbasic-TS) 通過 2 天喂養計劃維持干細胞的多能性

采用兩天喂養方案,無論細胞是人胚胎干細胞(hESC)還是誘導多能干細胞(iPSC),干細胞的多能性在傳代10次后都能得到有效維持;使用非酶傳代溶液 (XFPS) 或使用膠原基試劑 (CG) 進行傳代;在化學成分確定的基質 (XFM) 或基質膠 (MG) 中培養。通過對干細胞標記物(包括 SSEA-4、Tra1-60、Tra1-81 和 Oct3/4)進行細胞計數分析來證實多能性。


熱穩定性 FGF2 維持 FGF2 促進干細胞增殖的活性

通過兩天的喂養方案,iPSC 細胞培養物即使在傳代 10 次后仍保持健康的生長特性。下圖分別顯示了培養第2天和第6天的iPS細胞。


熱穩定 FGF2 (FGFbasic-TS) 不會誘發遺傳異常

干細胞培養物在長期培養過程中會出現遺傳異常。在使用 10 mg/mL FGFbasic-TS 的 2 天喂養計劃中,iPS 細胞系在第 10 次傳代后在核型分析中保持正常。



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